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ELISA试剂盒实验:八条黄金法则实验数据精彩呈现

人阅读 发布时间:2019-08-07 15:33

ELISA试剂盒实验:八条黄金法则实验数据精彩呈现

ELISA试剂盒为保证实验数据精彩呈现首要选定ELISA类型,ELISA技能可用于测定抗原,也可用于测定抗体。ELISA试剂盒方法中有三个必要的试剂:
(1) 固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent)
(2) 酶符号的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate)
(3) 酶反应的底物
ELISA试剂盒分为以下几种类型,实验君首要需求根据自己的待检物来判定试剂盒类型:
1. 双抗体夹心法:针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体别离作为固相捕获抗体和酶标检测抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原如血浆中的细胞因子,不适用于测定半抗原及小分子单价抗原。同理,也有双抗原夹心法测抗体。
2.直接法:将抗原直接固定在固相载体上,参与酶符号的一抗,即可测定抗原总量。此法操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反应。
3.间接法:间接法是检测抗体常用的方法,其原理为利用酶符号的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)来检测与固相抗原结合的待检抗体。
4.竞争法:小分子抗原或半抗原因缺少可作夹心法的两个以上的位点,因而不能用双抗体夹心法进行测定,可以选用竞争法模式。当抗原材猜中的烦扰物质不易除去,或不易得到满意的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。
根据样品中检测物水平来选择ELISA试剂盒:
如果实验君关于样品中待检物的水平没有任何可参看的数据,最好选择宽动力学检测规划的试剂盒。如果样品中待检物的含量很低,建议选择高灵敏度的试剂盒。为了下降基质效应,有必要用稀释液至少做2倍稀释。如果样品中待检物含量远超过试剂盒的检测规划(标曲规划), 也需做恰当的倍数稀释。在最终计算结果时,需乘以相应的稀释倍数。
根据样本可获得性来选择ELISA试剂盒:一般来说,商业化试剂盒的样品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供货商的试剂盒对样品的用量要求可少至10ul。如果您的样品很名贵或较难获取,则需求仔细考虑试剂盒对样品用量的要求。如果样品量少,且要做多因子检测时更需稳重。
ELISA试剂盒细致比较试剂盒要害性技能参数:
ELISA试剂盒的要害技能参数包括板内差异性、板间差异性、批间差异性、重复性、特异性及交叉反应性、回收率等。如果实验君常常打开ELISA实验,建议运用同一厂家的试剂盒,这样可尽量保证数据的重复性(当然条件是实验条件的一致性)。关于科研用的定量ELISA试剂盒,不同的生产厂家运用的抗体对、酶以及底物、生产工艺和研发实力不尽相同,天然不同厂家试剂盒测出的数据会有差异。

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