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胞浆或胞膜细胞因子(或受体)的检测

发布时间:2020-06-11 17:57 |  点击次数:

胞浆或胞膜细胞因子(或受体)的检测

许多细胞因子产生过程中,有一个胞浆到胞膜,再释放到体液或培养上清中的动态变化。一般可采用免疫组织化学染色技术或免疫荧光技术检测细胞或组织切片中细胞因子(或受体)定位(胞浆、胞膜),产生细胞的频数,以及胞浆、胞膜、上清中浓度改变的动态变化。目前已报道IL-2、TNF-α、IFN-γ等细胞因子以及几科所有细胞因子的受体可用这类方法进行检测。流式细胞仪(FCM)与间接免疫荧光法相结合检测细胞膜表面细胞因子受体,可获得客观正确的结果。用同位素标记配体或标记抗细胞因子受体的抗体,进行竞争结合试验,可检测细胞因子受体表达的数量以及亲和力大小。

四、 核酸标记技术检测法

通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法:

1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。

2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。

3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA,用特异性细胞因子引物经聚合酶链反应(PCR)扩增细胞因子cDNA,Southern blot后用标记探针检测特异细胞因子DNA水平。