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WB避坑指南 | Western免疫印迹技术大汇总(下)

人阅读 发布时间:2021-09-23 16:18

前几期,我们讲了其中包括它的概念、原理、应用场景、操作步骤以及注意事项等。相信大家也对Western Blot有一定的了解了,那这一期呢?我们就来给大家总结一些,在做Western Blot实验时,会经常遇到的问题,对这些问题,我们对此分析其原因以及解决方案。希望对各位,能找到你的答案!

 

Western Blot(蛋白质印迹法)

作为生物研究领域的必备实验技能

对于一个经验丰富的实验者来讲

提起Western Blot,不胜其烦

所以,对于科研小白

那就是望而生畏了

虽然这是一个基础实验

但这里的操作细节多、实验时间长,

这样就导致了,有些实验小伙伴

由于操作不细致,往往会出现各种各样的问题

当然,有时候也要靠运气,懂的都懂。

说多了都是泪

尽管如此,有些坑

大家还是可以规避的

下面,就向大家分享一些

WB实验中经常碰到的“坑”

常见问题及解决方案01 无条带或弱条带  

02 条带位置(大小)不对或有非特异性条带

   

03 出现黑点和黑斑

   

04条带中出现边缘规则的白圈

   

05 背景高

  

06 电泳过程中出现现象及问题

  

(1)整个条带呈 “ ︶ ” 状:凝胶冷却不均一,电泳槽老化。

(2)整个条带呈“ ︵ ”:凝胶左右两头没有凝固好

(3)溴酚蓝拖尾:样品溶解不好。

(4)纵向的纹理:上样样品中存在不溶性颗粒

(5)溴酚蓝很粗:浓缩胶浓缩效果不好,可能是浓缩胶太短,或者是浓缩胶配错。

(6)在分离胶中跑不动:Tris-Cl PH值不对,或者忘记加SDS。

07其他问题

  

(1)蛋白分子量偏高或者偏低。可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应,比如说100KD的蛋白你用12%的胶跑,或者说20KD的蛋白你用6%的胶跑。

(2)蛋白质降解。蛋白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带,然后会出现一些其他带,最主要特点是所有的条带比正常的都低,并且条带模糊不清晰。

(3)所有条带连成一片没有间隔。原因最可能是上样量过多,其次是样品弥散(比如电泳长时间停止样品弥散)。

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