免疫印迹检测法（Western blotting）,又称蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免
疫遗传学等生命科学研究中常用的的一种实验方法，其基本原理是通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶
电泳区分待测样品不同的组分，再在电流的作用下，使蛋白质从凝胶转移至固相载体（膜）
上，通过特异性抗体作为探针，对靶抗原蛋白质进行检测，通过分析特异性反应的位置和强
度获得特定蛋白质在所分析的细胞或（和）组织中表达情况的信息。
一、 基本原理
Western blotting 实验通常由 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白质的印迹和检测两个部分组
成。
第一部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
1、 蛋白质的电泳分离是指带电粒子在电场作用下,向着与其所带电荷相反的电极移动的
现象，各种蛋白质因所带的净电荷、分子量大小和形状不同而有不同的迁移率。聚丙
烯酰胺凝胶（PAG）是由丙烯酰胺单体（Acr）和交联剂亚甲基双丙烯酰胺（Bis）在
催化剂过硫酸铵作用下聚合交联而成的三维网状结构凝胶。如果在电泳体系加入十二
烷基硫酸钠（SDS），则电泳迁移率主要依赖于分子量，与所带的净电荷和形状无关。
这种电泳方法称为 SDS-PAGE，主要用于测定蛋白质亚基分子量。
2、 电泳启动后，蛋白样品先在浓缩胶中运动，由于浓缩胶孔径大，蛋白质运动受阻小，
因此不同的蛋白质就浓缩到分离胶之上层，全部蛋白质处于同一起跑线上。当蛋白质
进入分离胶时，因单位质量带负电荷多者迁移快，反之则慢，即分子量小的蛋白迁移
快，分子量大的蛋白迁移慢；由于分离胶孔径小，而且成为一个整体的筛状结构，它
们对大分子阻力大，小分子阻力小，因而蛋白质在电泳过程中最终达到彼此分开。
3、 由于凝胶浓度不同，平均孔径不同，能通过的可移动样品蛋白质的分子量也不同。选
择一定的凝胶浓度，即选择合适的凝胶孔径，可使待分离样品蛋白质的泳动速率差异
最大，得到最佳分离效果。通常根据被分离蛋白质的分子量范围选择凝胶浓度。
 凝胶浓度与蛋白质分子量测定的关系
蛋白质分子量范围(KD) 凝胶浓度(%)
<10 15
10-30 12
30-100 10
100-500 8
>500 5